癌癥是一類嚴重危害人體健康的疾病，運動對 癌癥發生發展的影響已有一些研究，如近年有基礎 研究指出運動訓練可以促使小鼠脾NK細胞向腫瘤 細胞浸潤，從而減緩腫瘤的發生發展，從一些臨床 研究來看，適當的運動對于癌癥患者也有一定的積 極作用。但不同運動強度對腫瘤發展的影響研 究較少。本研究選擇有氧運動和力竭運動，探討運 動及運動強度對小鼠腫瘤生長的影響。

1 材料與方法

1.1 動物

ICR 和 C57BL/6 小鼠，SPF 級體重 18—20g，雄 性，購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，動物 合格證號SCXK(京)2016-0011。

1.2 瘤株

小鼠肝癌細胞 H22，小鼠黑色素瘤細胞 B16-F10，小鼠淋巴瘤細胞Yac-1。北京大學醫學部實驗 動物部提供。

1.3 實驗試劑

RPMI1640培養基，胎牛血清，刀豆蛋白A(Con A)、四甲基偶氮唑鹽(MTT)(美國 Sigma 公司)；二甲 基亞砜(DMSO)(北京化工廠)；乳酸脫氫酶細胞毒性 檢測試劑盒(碧云天生物技術有限公司)。

1.4 儀器

Sartorious BT-25S型電子分析天平（北京Sartorius 儀器有限公司）；G&G JJ550 型精密電子天平 （美國雙杰兄弟有限公司）；1—14 高速臺式離心機 （德國Sigma公司）；VD-1320潔凈工作臺（哈爾濱市 東聯電子技術開發有限公司）；超低溫冰箱（美國 Sanyo 公司）；TE2000-S 型倒置顯微鏡（日本 Nikon 公司）；MCO-18A/C(UV) CO2培養箱(日本Sanyo公 司)；Spectra-Max-190 型酶標儀(美國分子儀器公司)，MH-Ⅰ型微量振蕩器(江蘇海門市其林貝爾儀器制造有限公司)。

1.5 小鼠分組與處理

小鼠適應性喂養兩天后，將小鼠隨機分為6組， 每組12只，分組如下： 正常對照組：本組小鼠均為未接瘤健康小鼠，自 由飲食，不做其他處理。 荷瘤對照組：本組小鼠均自由飲食，實驗開始后 第7天接種腫瘤，不做其他處理。 持續有氧組：本組小鼠每天進行游泳訓練：取一 大小約為 60cm × 50cm × 50cm 水槽，加水至深度 40cm，水溫控制在（30±1）℃，將本組小鼠置于水槽 中游泳后撈出，時間從30min逐漸持續至60min，用 吹風機吹干后放回籠中，每天一次，在實驗開始后第 7天接種腫瘤。 持續力竭組：本組小鼠每天進行負重游泳訓練： 容器規格同上，負重為體重5%，材料為自制鐵絲圈， 固定于小鼠尾部，將本組小鼠置于水槽中，小鼠游泳 至力竭撈出，用吹風機吹干后放回籠中，力竭判斷標，即為小鼠游泳動作明顯失調(劃水頻 率極其緩慢，連續下沉)，不能再堅持，沉入水底連續 8s不能回到水面，撈出水面時翻正反射消失。本組 小鼠在實驗開始后第7天接種腫瘤。 荷瘤后有氧組：本組小鼠在實驗開始后第7天 接種腫瘤，其后每天進行上述有氧游泳訓練，每天一 次。 荷瘤后力竭組：本組小鼠在實驗開始后第7天 接種腫瘤，其后每天進行上述力竭游泳訓練，每天一 次。

1.6 小鼠腫瘤接種

將H22瘤株經ICR小鼠腹水 傳代后，無菌取小鼠腹水瘤，用 PBS 稀釋并調整細 胞密度為1×107 個/ml，接種于ICR小鼠前肢腋下，每 只 0.2ml；取對數生長期的 B16-F10 腫瘤細胞株，消 化后用PBS混懸并調整細胞密度為1×107 個/ml，接 種于C57BL/6小鼠前肢腋下，每只0.2ml，觀察并記 錄小鼠腫瘤生長情況。

1.7 小鼠體重、瘤重、脾臟重、胸腺重測定及脾臟指 數、胸腺指數計算

實驗每天對小鼠進行一般情況觀察，共持續21天，實驗最后一天稱重后處死小 鼠，剝離小鼠腫瘤組織、脾臟和胸腺，精密稱定，計算 胸腺指數和脾臟指數：胸腺指數=[胸腺質量(mg)/體 重(g)]×10；脾臟指數=[脾臟質量(mg)/體重(g)]×10。

1.8 脾淋巴細胞增殖

小鼠無菌取脾后，常規分離脾 細胞，細胞懸液調整密度為 5×106 /ml，加入 96 孔細 胞培養板，100μl/孔，每組設4個復孔。將刀豆蛋白 conA 粉末用 PBS 溶液配成 5mg/ml 溶液，再用 1640 培養基最終稀釋成5μg/ml刀豆蛋白溶液，實驗組加 入該溶液 100μl/孔，對照組加入 100μl/孔的 1640 培 養基。置37℃，5%CO2培養箱中孵育20h，1000r/min 離心 96 孔板 10min，棄上清，然后加入 0.5mg/ml 的 MTT 100μl/孔，37℃，5%CO2培養箱中繼續孵育4h， 再次以 1000r/min 離心 96 孔板 10min，棄上清，每孔 加入二甲基亞砜150μl，振蕩搖勻，30min后，用酶標 儀測定(570nm)，脾淋巴細胞增殖能力計算：脾細胞 實驗組A(吸光度)值-對照組A(吸收度)值。

1.9 Yac-1細胞乳酸脫氫酶（LDH）釋放法檢測小鼠脾NK細胞殺傷能力

設置實驗組和小鼠淋巴瘤細胞Yac-1自然釋放 組，每組4個復孔，其中實驗組將上述調整好的脾細 胞懸液加入96孔細胞培養板，100μl/孔，再將培養后 調整為1×105 /ml的Yac-1細胞懸液加入96孔細胞培 養板，100μl/孔；Yac-1細胞自然釋放組加入100μl的 Yac-1 細胞懸液，再加入 100μl 1640 培養基。置 37℃,5%CO2培養箱中孵育 4h，1000r/min 離心 96 孔 板10min，每孔吸出120μl上清至一新的96孔細胞培 養板相應位置，各孔分別加入 60μl LDH 檢測工作 液，混勻，室溫(約25℃)避光孵育30min(可用鋁箔包 裹后置于水平搖床或側擺搖床上緩慢搖動)，然后用 酶標儀在490nm處測定吸光度值。脾NK細胞殺傷 活性計算：實驗組A(吸光度)值-Yac-1自然釋放組A( 吸光度)值。

2 結果

ICR 小鼠荷瘤后有氧組瘤重減少 （與荷瘤對照組相比，P＜0.05），持續有氧組及荷瘤 后力竭組瘤重有一定下降趨勢，持續力竭組小鼠瘤重有一定增加趨勢，但與荷瘤對照組相比均無顯著 性差異。另外，ICR小鼠荷瘤對照組比正常對照組 和其他實驗組體重均明顯升高（與正常對照組相比， P＜0.001）。C57BL/6 小鼠持續力竭組瘤重增 加（與荷瘤對照組相比，P＜0.05），其他荷瘤組瘤重 與荷瘤對照組相比沒有顯著性差異。持續力竭組小 鼠體重顯著高于荷瘤對照組（P＜0.01）及其他組小 鼠體重，可能與這組小鼠的瘤重較大有關。

3 討論

研究小鼠荷瘤前后運動及不同運動強度對小鼠 體重、瘤重、脾指數、胸腺指數、脾淋巴細胞增殖能 力、脾NK細胞殺傷能力等的影響發現，雖然荷不同 移植性腫瘤的不同品系小鼠對有氧和力竭兩種運動 強度迥異的游泳訓練反應有所不同，但總的趨勢相似：有氧運動可以抑制某些小鼠腫瘤生長而力竭運 動往往有利于某些腫瘤的生長；瘤重的變化與運動 強度對小鼠脾臟和胸腺功能的影響有關。



 

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