真菌毒素（ｍｙｃｏｔｏｘｉｎｓ）也叫霉菌毒素，是產毒 真菌在適宜環境條件下的次級代謝產物，具有生物 毒性。截至目前已分離得到 100 多種真菌，可產生 大約 300 種有毒的次級代謝產物。農產品中常見 的真菌毒素有黃曲霉毒素（ａｆｌａｔｏｘｉｎ）、赭曲霉毒素 （ｏｃｈｒａｔｏｘｉｎ）、玉米赤霉烯酮（ｚｅａｒａｌｅｎｏｎｅ）、伏馬 毒素（ｆｕｍｏｎｉｓｉｎ）、雜色曲霉素（ｓｔｅｒｉｇｍａｔｏｃｙｓｔｉｎ）、 單端孢霉烯族毒素（ｔｒｉｃｈｏｔｈｅｃｅｎｅｓ）以及橘青霉素 （ｃｉｔｒｉｎｉｎ）等。糧谷類農作物在種植過程中和貯藏 期間容易受到真菌的侵染，導致真菌毒素污染情況 普遍存在。由于近年來受全球氣候變暖、干旱等 因素的影響，世界各國真菌毒素暴露事件屢見不鮮， 特別是糧谷產品中多種真菌毒素混合污染現象頻頻發生，真菌毒素多殘留檢測受到越來越多的關 注和重視。

1 實驗部分

1．1 儀器、試劑與材料

四 極 桿／ 靜電場軌道阱高分辨質譜儀 Ｑ－ Ｅｘａｃｔｉｖｅ、ＵｌｔｉＭａｔｅ 3000 高效液相色譜儀，Ｔｈｅｒｍｏ Ｈｙｐｅｒｓｉｌ Ｇｏｌｄ Ｃ18柱（100 ｍｍ×2. 1 ｍｍ，1. 9 μｍ） （美 國 Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ 公 司）；Ｃａｐｔｉｖａ ＥＭＲ－Ｌｉｐｉｄ 凈 化 柱 （3 ｍＬ，美 國 Ａｇｉｌｅｎｔ 公 司）； 3Ｋ15 離心機（德國 Ｓｉｇｍａ 公司）；ＤＬ－5Ｃ 低速大容 量離心機（上海安亭科學儀器廠）；ＯＡ－ＳＹＳ 氮吹儀 （美國 Ｏｒｇａｎｏｍａｔｉｏｎ 公司）；Ｍｉｌｌｉ－Ｑ 超純水純化系統 （美國 Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ 公司）；渦旋混合器（德國 ＩＫＡ 公司）。 黃曲霉毒素 Ｂ1 標準品溶液（ａｆｌａｔｏｘｉｎ－Ｂ1，質量 濃度為 2. 0 ｍｇ ／ Ｌ）、黃 曲 霉 毒 素 Ｂ2 標 準 品 溶 液 （ａｆｌａｔｏｘｉｎ－Ｂ2，質量濃度為 0. 5 ｍｇ ／ Ｌ）、黃曲霉毒素 Ｇ1 標 準 品 溶 液 （ａｆｌａｔｏｘｉｎ－Ｇ1，質 量 濃 度 為 2. 0 ｍｇ ／ Ｌ）、黃曲霉毒素 Ｇ2 標準品溶液（ａｆｌａｔｏｘｉｎ－Ｇ2， 質量濃度為 0. 5 ｍｇ ／ Ｌ）購自美國 Ｔｒｉｌｏｇｙ 公司；黃曲 霉毒素 Ｍ1（ａｆｌａｔｏｘｉｎ Ｍ1，純度為 99. 8％）、脫氧雪腐 鐮刀菌烯醇（ｄｅｏｘｙｎｉｖａｌｅｎｏｌ，純度為 99. 6％）、3－乙酰基脫氧雪腐鐮刀菌烯醇 （3－ａｃｅｔｙｌ ｄｅｏｘｙｎｉ－ ｖａｌｅｎｏｌ，純度為 99. 0％）、15－乙酰基脫氧雪腐鐮刀菌 烯醇（15－ａｃｅｔｙｌ ｄｅｏｘｙｎｉｖａｌｅｎｏｌ，純度為 99. 0％）、赭 曲霉毒素 Ａ（ｏｃｈｒａｔｏｘｉｎ－Ａ，純度為 99. 9％）、黃曲霉 毒素 Ｍ2（ａｆｌａｔｏｘｉｎ Ｍ2，純度為 99. 0％）、玉米赤霉烯 酮（ｚｅａｒａｌｅｎｏｎｅ，純度為 99. 0％）、黃綠青霉素（ｃｉｔ－ ｒｅｏｖｉｒｉｄｉｎ，純 度 為 98. 0％）、蛇 形 菌 素 （ｄｉａｃｅｔｏｘｙ－ ｓｃｉｒｐｅｎｏｌ，純度為 98. 0％）、伏馬毒素 Ｂ1 標準品溶液 （ｆｕｍｏｎｉｓｉｎ Ｂ1，質量濃度為 99. 7 ｍｇ ／ Ｌ）、伏馬毒素 Ｂ2 標 準 品 溶 液 （ｆｕｍｏｎｉｓｉｎ Ｂ2，質 量 濃 度 為 100 ｍｇ ／ Ｌ）、伏馬毒素 Ｂ3 標準品溶液（ｆｕｍｏｎｉｓｉｎ Ｂ3，質 量濃度為 100 ｍｇ ／ Ｌ）、ＨＴ－2 毒素（ＨＴ－2 ｔｏｘｉｎ，純度 為 99. 0％）、Ｔ－2 毒素（Ｔ－2 ｔｏｘｉｎ，純度為98. 0％）、雜色 曲霉素（ｓｔｅｒｉｇｍａｔｏｃｙｓｔｉｎ，純度為 99. 2％）均購自美 國 Ａｃｈｅｍｔｅｋ 公司，桔青霉素標準品溶液（ｃｉｔｒｉｎｉｎ，質 量濃度為 10 ｇ ／ Ｌ）購自以色列 Ｆｅｒｍｅｎｔｅｋ 公司。 乙腈和甲醇（色譜純，德國 Ｍｅｒｃｋ 公司）；甲酸 （色譜純，美國 Ｄｉｋｍａ 公司）；甲酸銨（色譜純，上海麥克林公司）；無水硫酸鎂和氯化鈉（優級純，天津 科密歐公司）。

1．2 樣品前處理

準確稱取 5. 00 ｇ 樣品于 50 ｍＬ 聚丙烯具塞離 心管中，加入 10 ｍＬ 水，渦旋混勻，再加入 10 ｍＬ 乙 腈（含 2％ 甲酸）、4 ｇ 硫酸鎂和 1. 5 ｇ 氯化鈉，振蕩提 取 10 ｍｉｎ，在 4 ℃條件下，以 5 000 ｒ ／ ｍｉｎ 的速度離 心 5 ｍｉｎ，移出 8 ｍＬ 上層乙腈相，加入 2 ｍＬ 水，渦 旋混合。取 3 ｍＬ 萃取液上樣到 Ｃａｐｔｉｖａ ＥＭＲ－Ｌｉｐｉｄ 凈化柱，使其在重力作用下流過凈化柱并收集凈化 液，待萃取液完全流過后，加壓排空凈化柱。取 2. 5 ｍＬ 凈 化 液 于 40 ℃ 水浴中氮吹至近干，用 5 ｍｍｏｌ ／ Ｌ 甲酸銨（含 0. 1％ 甲酸）－乙腈溶液（5 ∶ 5， ｖ ／ ｖ）定容至 1 ｍＬ，充分混勻后，過 0. 22 μｍ 有機相 濾膜，進樣分析。

1．3 色譜－質譜條件

Ｔｈｅｒｍｏ Ｈｙｐｅｒｓｉｌ Ｇｏｌｄ Ｃ18 柱（100 ｍｍ × 2. 1 ｍｍ，1. 9 μｍ）；柱溫：40 ℃；進樣量：10 μＬ。流動 相：Ａ 為 5 ｍｍｏｌ ／ Ｌ 甲酸銨水溶液，Ｂ 為乙腈－甲醇 （1 ∶1，ｖ ／ ｖ）；流速：0. 35 ｍＬ ／ ｍｉｎ。梯度洗脫條件：0 ～ 0. 8 ｍｉｎ，2％ Ｂ；0. 8～3. 0 ｍｉｎ，2％ ～24％ Ｂ；3. 0～ 4. 0 ｍｉｎ，24％ Ｂ；4. 0 ～ 6. 0 ｍｉｎ，24％ ～ 95％ Ｂ；6. 0 ～9. 0 ｍｉｎ，95％ Ｂ；9. 0 ～ 9. 5 ｍｉｎ，95％ Ｂ ～ 2％ Ｂ； 9. 5～12. 0 ｍｉｎ，2％ Ｂ。

2 結果與討論

因為本研究所檢測的真菌毒素種類較多，需要 兼顧各類目標待測物的提取效率。真菌毒素常用的 提取試劑有乙腈、甲醇、乙酸乙酯、丙酮、氯仿、正己 烷、二氯甲烷等，考察不同提取劑對目標物的提取效 果，其中甲醇、乙腈對各種真菌毒素均有較好的提取 效率，優于其他幾種提取劑。乙腈為極性較強的低 毒溶劑，具有優良的溶解性，對大多數非極性和部分 極性真菌毒素有較高的提取率，并可促使蛋白質變 性沉淀，提高提取效率，因此本研究選用乙腈（或 乙腈體系）作為提取劑。部分真菌毒素對 ｐＨ、極性 范圍比較敏感，可在提取時加入輔助試劑增強聯合 提取效果，研究發現乙腈作為提取劑加入甲酸 可以提高伏馬毒素、赭曲霉毒素等的提取效果，經過 實驗優化最終選擇乙腈（含 2％ 甲酸）作為提取液， 各種目標待測物均取得了良好的提取效果。采用空白樣品基質溶液準確配制不同質量濃度 的混合標準工作液，經高分辨質譜檢測，以色譜峰面 積（Ｙ）為縱坐標、對照溶液的質量濃度（Ｘ，μｇ ／ Ｌ） 為橫坐標繪制標準曲線。高分辨質譜使用目標物的 精確質量數提取，基線噪音很低，信噪比往往無窮 大，因此不采用以 3 倍信噪比（Ｓ ／ Ｎ）確定化合物檢 出限、10 倍信噪比確定化合物定量限（ＬＯＱ）的方 法，而是用向空白樣品中逐級降低加標濃度，以各目 標物在線性范圍中滿足回收率值在 60％ ～ 120％ 區 間內的最低濃度為方法的定量限。結果表明，20 種 真菌毒素在相應濃度范圍內呈良好的線性關系，相 關系數（ｒ2 ）均＞0. 99，定量限為 0. 25 ～ 20 μｇ ／ ｋｇ，可 滿足檢測要求。

3 結論

利用高效液相色譜－四極桿／ 靜電場軌道 阱高分辨質譜，快速篩查和確證了糧谷產品中 20 種 真菌毒素。高分辨質譜保證了復雜樣品中基質干擾 的消除，顯著提高了目標物定性和定量結果的準確 性。該方法快速、靈敏、準確，可滿足糧谷產品中真 菌毒素的大通量快速篩查和確證。